Perfiles de expresión de los genes ERG11, MDR1 y AFR1 en Cryptococcus neoformans var. grubii aislados de pacientes con HIV / Gene expression profiles of ERG11, MDR1 y AFR1 in Cryptococcus neoformans var. grubbi isolated from HIV patients

Introducción. El fluconazol es el antifúngico más utilizado para la prevención y el tratamiento de infecciones causadas por el género Cryptococcus, agente etiológico de la criptococosis. La resistencia al fluconazol en los aislamientos de Cryptoccocus neoformans puede hacer fracasar el tratamiento y generar recaídas de la infección. Objetivo. Evaluar los perfiles de expresión de los genes AFR1, MDR1 y ERG11 en aislamientos clínicos de C. neoformans var. grubii, durante la respuesta in vitro a la inducción con fluconazol. Materiales y métodos. Se estudiaron 14 aislamientos de C. neoformans var. grubii provenientes de pacientes con HIV, de los cuales 6 eran sensibles al fluconaol y 8 presentaban sensibilidad disminuida. Los niveles de expresión de los genes ERG11, AFR1 y MDR1 se determinaron mediante PCR en tiempo real. Resultados. Los aislamientos resistentes al fluconazol mostraron sobreexpresión de los genes AFR1 y MDR1, mientras que la expresión de los fenotipos de resistencia evaluados se mantuvo homogénea en ERG11, en todos los aislamientos de C. neoformans var. grubii. Conclusiones. La sobreexpresión de los genes AFR1 y MDR1 que codifican las bombas de eflujo, contribuye a la resistencia al fluconazol en los aislamientos estudiados. Sin embargo, los patrones de resistencia que se registran en este hongo, sumado a los casos de recaídas en pacientes con HIV, no pueden atribuirse únicamente a los casos de resistencia por exposición al fármaco. Otros mecanismos podrían también estar involucrados en este fenómeno, como la resistencia emergente (resistencia mediante otros genes ERG) y la heterorresistencia, los cuales deben ser estudiados en estos aislamientos.

Introduction: Fluconazole is the most used antifungal drug for prevention and treatment of Cryptococcus spp. infections, the etiological agent of cryptococcosis. Resistance to fluconazole among Cryptococcus neoformans isolates can lead to treatment failure and generate relapses. Objective: To evaluate the expression profles of the AFR1, MDR1 and ERG11 genes in C. neoformans var. grubii clinical isolates during the in vitro response to fluconazole induction. Materials and methods: Fourteen C. neoformans var. grubii isolates recovered from HIV patients were studied, in which 6 showed sensitivities to fluconazole and 8 decreased sensitivity. The expression levels of ERG11, AFR1 and MDR1 genes were determined by real-time PCR from extracted mRNA. Results: AFR1 and MDR1 genes from C. neoformans var. grubii were overexpressed in fluconazole resistant isolates, whereas ERG11 maintains homogeneous expression in all the evaluated resistance phenotypes of C. neoformans var. grubii isolates. Conclusions: The overexpression of AFR1 and MDR1 genes, which codify for efflux pumps, contributes to fluconazole resistance in the studied isolates. However, the resistance patterns in this fungus and the relapse cases in HIV patients cannot be attributed solely to the exposure to the drug. Heteroresistance and the emerging resistance (resistance through other ERG genes), might be other mechanisms involved in this phenomenon, which must be studied in these isolations.

Evaluación hemodinámica no invasiva con cardiografía de impedancia: aplicaciones en falla cardíaca y en hipertensión arterial / Non-invasive hemodynamic evaluation with impedance cardiography: applications in heart failure and hypertension

La cardiografía de impendancia (CGI) representa un método no invasivo para la evaluación del estado hemodinámico latido a latido. Aunque se introdujo por primera vez hace más de 40 años, la CGI ha mostrado un resurgimiento en la última década, a partir de una serie de estudios clínicos que han demostrado su precisión en la estimación del volumen latido, tanto contra el "gold-standard" invasivo (termodilución), como contra los métodos de referencia no invasivos (ecocardiografía). Diversos estudios demuestran la utilidad de esta técnica en el manejo del paciente con falla cardíaca y en el enfoque diagnóstico y terapéutico de la hipertensión arterial, por lo cual constituyen actualmente dos de las aplicaciones clínicas más importantes de la CGI. En falla cardiaca, los cambios en el volumen de líquido del tórax y del gasto cardíaco evaluados por CGI, han demostrado ser predictores de descompensación aguda, incluso semanas antes del inicio de la sintomatología respiratoria; además, permiten identificar el origen cardiogénico o respiratorio de la disnea cuando el examen físico y los demás paraclínicos no son concluyentes. En los pacientes con hipertensión arterial no controlada o resistente, la CGI permite realizar una mejor caracterización del fenotipo hipertensivo y elegir la estrategia farmacológica más específica para intervenir la alteración hemodinámica predominante (resistencia vascular vs. gasto cardiaco elevado). En este artículo se realiza una revisión de los principios biofísicos de la CGI y su utilidad en la evaluación no invasiva del estado hemodinámico, así como una evaluación crítica de la literatura que da soporte a su aplicación clínica en el tratamiento de la falla cardíaca y la hipertensión arterial.

Impedance cardiography (ICG) represents a non-invasive method for hemodynamic assessment in a beat-to-beat basis. Since its introduction more than forty years ago, a renewed interest in the use of this technique during the last decade has been noticed, mainly as a result of a series of clinical studies showing its precision in the estimation of stroke volume either against invasive gold standard (i.e. thermodilution) or against non-invasive reference methods (i.e. echocardiography). On the other hand, ICG has demonstrated to be useful for the management of heart failure patients and for the diagnostic and therapeutic approach to hypertension, which currently constitute two of the major applications of ICG. In heart failure patients, changes in thoracic fluid content and cardiac output tracked by ICG have shown to be predictors of acute decompensation even weeks before respiratory symptoms appear; also allowing identification of a cardiac vs. respiratory origin of dyspnea when physical examination and laboratory tests are not conclusive. In the particular case of patients with uncontrolled or severe hypertension, ICG makes possible a better characterization of hypertensive phenotype leading to a more specific choice of pharmacological agents to treat the primary hemodynamic alteration (i.e elevated peripheral resistance vs. elevated cardiac output). The present review, provides a review of the biophysical principles of ICG and its precision in measuring stroke volume and present a critical assessment of the literature supporting its clinical application in the management of heart failure and arterial hypertension.

Identificación de algunos genes asociados al proceso de germinación de la conidia al micelio en Paracoccidioides brasiliensis / Identification of genes associated with germination of conidia to form mycelia in the fungus Paracoccidioides brasiliensis

Introducción. Paracoccidioides brasiliensis es un hongo dimórfico térmico, que a temperatura ambiente se presenta como un moho productor de conidias, mientras que en el huésped se comporta como una levadura de gemación múltiple. Los mecanismos moleculares que rigen la germinación de conidia a micelio aún se desconocen. Objetivo. Estudiar en P. brasiliensis la cinética del proceso de germinación de conidia a micelio y determinar los genes expresados durante este proceso mediante la construcción y el análisis de una librería EST (Expressed Sequence Tag). Materiales y métodos. Para el estudio de la cinética de germinación, se produjeron y aislaron conidias de P. brasiliensis. Estas fueron incubadas en cultivos líquidos a 18°C por 24, 48, 72 y 96 horas, y se examinaron por microscopía de luz. A partir de conidias cultivadas por 96 horas, se construyó y caracterizó una librería EST, la cual representaría los genes expresados durante el proceso de germinación. Resultados. Durante el proceso de germinación de conidia a micelio, se observó 11,7±1,2%, 30±0,6%, 43±1,3% y 66±2,4% de germinación a las 24, 48, 72 y 96 horas de incubación, respectivamente. Además, se obtuvo una librería del proceso de germinación consistente en 129 secuencias agrupadas en cuatro secuencias contiguas y siete secuencias únicas, para un total de 11 posibles genes. Ocho secuencias (72,7%) no habían sido descritas anteriormente en otras librerías informadas para este hongo y podrían representar genes específicos de la germinación de conidia a micelio. Conclusiones. Éste es el primer reporte en el que se identifican genes no descritos anteriormente, que son expresados durante la germinación de conidia a micelio, proceso de gran importancia en la biología de P. brasiliensis.

Introduction. Paracoccidioides brasiliensis is a thermo-dimorphic fungus. At room temperature it grows as a mold that produces conidia, whereas in the vertebrate host it grows as a multiple-budding yeast. The molecular mechanisms involved in the germination from the conidia to the mycelia process remain unknown. Objective. The kinetics of conidia to mycelia germination process were studied in the dimorphic fungus P. brasiliensis. Gene expression during this process was evaluated by construction and analysis of an EST library. Materials and methods. For the germination kinetics study, P. brasiliensis conidia were isolated as single cell units. Then, they were cultured at 18° C in BHI (brain-heart infusion) broth for 24, 48, 72 and 96 hr. After each perion, they were examined by light microscopy. From conidia harvested at 96 hr, an EST library was constructed; at this stage the gene expression was presumed to be maximal for the germination process. Results. During the conidia to the mycelia developmental process, the following germination rates were observed: at 24 hr, 11.7±1.2%; at 48 hr, 30±0.6%; at 72 hr, 43±1.3%; and at 96 hr, 66±2.4%. At the 96 hour stage, an EST library was constructed. It consisted of 129 sequences grouped in 4 contigs and 7 singlets for a total of 11 possible genes. Eight of the sequences had not been described previously in other EST libraries of this fungus. Conclusions. New genes were identified that were expressed during the conidia to the mycelia germination process and may represent genes specific to the germination process.

Presencia de Chlamydia pneumoniae en placas ateroscleróticas / Chlamydia pneumoniae presence in atherosclerotic plaques

Chlamydia pneumoniae es un patógeno mundialmente reconocido como causante de infecciones del tracto respiratorio en humanos, se caracteriza por ser un microorganismo intracelular obligado. Al presente, se ha comprobado su presencia en placas ateromatosas por múltiples técnicas como la inmunohistoquímica, la microscopía electrónica y la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). La enfermedad aterosclerótica, es responsable de muchos de los accidentes cerebrovasculares y cardiovasculares. Sin embargo el papel patogénico de este microorganismo en dicha enfermedad aun no es claro. En este estudio, por medio de ka reacción en cadena de la polimerasa (PCR) se logró comprobar la presencia de C. pneumoniae en el 28 por ciento de 93 muestras de tejido vascular provenientes de pacientes que fueron sometidos a cirugía de revascularización quirúrgica. La presencia de este microorganismo en tejido vascular de pacientes con enfermedad coronaria podría considerarse como un factor de riesgo cardiovascular para el desarrollo de aterosclerosis y enfermedades cerebrovasculares

Molecular cloning and characterization of two hsp 70 homologous genes from the dimorphic fungus paracoccidioides brasiliensis / Clonaje y caracterización molecular de dos genes homólogos hsp70 del hongo dimórfico Paracoccidioides brasilensis

.Paracoccidiodes brasiliensis es el agente etiológico de la Paracoccidioidomicosis (PCM), una de las micosis sistémicas mas importantes en Latinoamérica. Dos genes hsp70 (Clones 2.2 y 1DB5) fueron clonados, caracterizados y secuenciados. El análisis de secuencia mostró que los clones 2.2 y 1DB5 poseen una alta homología con la familia de genes de choque térmico hsp70. Mediante la utilización de fragmentos de ADN provenientes de ambos clones, se determinó la expresión por Northern blot durante la fase de transición a levadura. Nosotros encontramos los niveles mas altos de transcriptos ocurre entre los 30 min y 6 h después de cambiar la temperatura a 37ºC. Entre las 36 y 48 h, se reducen los niveles de ARNm. Sin embargo, los niveles de ARNm aumentan a las 72 h hasta alcanzar la fase de levadura. Como resultado del aumento de la temperatura durante la fase de transición micelio a levadura, se incrementa la expresión de genes hsp70 sugiriendo que las proteínas de choque térmico tienen un papel durante el proceso de diferenciación.

Nuevos aspectos sobre la clasificación de los hongos y su posible aplicación médica / New fungal classification and their applications in medicine

En la última década se ha despertado un gran interés por el estudio de la clasificación de los hongos debido, principalmente, al número creciente de patógenos oportunistas. Actualmente, los métodos tradicionales para la identificación y clasificación de estos microorganismos se basan en criterios morfológicos y en las características de las estructuras de reproducción sexuada y asexuada. En los últimos años, sin embargo, se han demostrado incongruencias de este sistema de clasificación cuando se lo compara con nuevos acercamientos que permiten establecer relaciones de descendencia entre los organismos estudiados. Este artículo revisa varios aspectos novedosos: 1) la ubicación de los hongos en los diversos sistemas de clasificación propuestos en el transcurso de la historia; 2) el reconocimiento de la polifilia de los hongos, gracias al empleo de herramientas comparativas basadas en las secuencias de ácidos nucleicos y en el análisis de las relaciones de descendencia, y 3) los aportes de la filogenética molecular a varios aspectos de interés para la micología médica como son la identificación de los agentes micóticos, su epidemiología y prevención y el diagnóstico de las enfermedades que producen.